托曲珠利是一种新型甲基三嗪酮化合物，属 动物专用均三嗪类抗球虫药。该药最早由德国拜 耳公司研发上市，因其
广谱、高效、低毒的特性使 其具有优良的抗球虫效果 。在兽医临床上通 常制成饮水剂或混悬剂内服用于牛、羊、家禽、
仔 猪等动物的球虫病防控 。帕托珠利作为托曲 珠利在动物体内的主要活性代谢物，对球虫发育 的各个阶段均有抑制作用，
目前在欧美等国家仅 被批准用于治疗马原虫性脑脊髓炎，尚未被单独开发成防控鸡球虫病的抗球虫药。目前关于 帕托珠
利和托曲珠利在生物样品中含量的测定 方法主要有高效液相色谱法（HPLC和高效液 相色谱-质谱/质谱法（HPLC-MS/M
S）。但有 关鸡血浆中帕托珠利含量的测定方法报道较少。 本研究通过建立一种利用HPLC测定鸡血浆中帕 托珠利和托曲
珠利含量的方法，为研究帕托珠利 在鸡体内的药代动力学特征及其生物利用度奠定 基础
一、材料与方法
1、主要试剂及仪器
帕托珠利对照品（含量99.4%，批号190201WS）、托曲珠利对照品（含量99.7%，批号190304WS）均购自湖北
龙翔药业科技股份有限公司。 高效液相色谱仪（Agilent1260 型、ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱），Agilent 公司产
品；电子 天平（QUINTIX124-1CN 型），德国赛多利斯天平 公司产品；超纯水仪（GREEN-Q3 型），南京易普 易达有
限公司产品；氮吹仪（N-EVAP-12型），美 国Organomation Associates 公司产品；台式高速冷 冻离心机（Centrifuge
5810R 型），德国 Eppendorf 公司产品。
2、方法
试液配制
帕托珠利及托曲珠利标准储备液：精密称取帕托珠利、托曲珠利对照品各25 mg于25 mL容量 瓶中，加甲醇溶解并
定容，-20 ℃保存。 标准工作液：取适量帕托珠利和托曲珠利标 准储备液，分别用其流动相（0.2%乙酸水-乙腈、 0.02
mol/L磷酸二氢钾缓冲液-乙腈）稀释成不同 浓度的混合溶液。
血浆样品预处理方法
帕托珠利血浆样品预处理：取0.2 mL新鲜或冻融血浆于 2 mL 离心管中，加入 1 mL 乙酸乙酯，涡旋5min 后12000
r/min离心10 min。吸取 上清液至5 mL离心管中，残渣加入0.5 mL乙酸乙 酯重复提取，两次上清液合并后经氮气吹干，
最后 用0.2 mL流动相复溶，涡旋振荡后，0.22 μm滤膜 过滤。 托曲珠利血浆样品预处理：基本提取步骤同 上，提取剂更
换为0.4 mL 的 0.1%甲酸乙腈，且无 需重复提取。
色谱条件
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱；帕托珠利流动相为0.2%乙酸水-乙腈（47∶53，v/v），柱温 35℃，检测
波长 250 nm；托曲珠利流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（40∶60，v/v）；柱温30 ℃，检测波长240 nm。
流速均为1 mL/min； 进样量20 μL。
3、方法学验证
标准曲线的绘制
分别精确吸取两种药物的标准工作液，制得浓度为 0.1、0.5、1、2、4、10、20 μg/mL 的空白血浆质控样品。按
血浆样品预处理步骤后上机分析，记录峰面积，以两种药物峰面积对血药浓度进行 回归，计算线性和线性范围。
检测限与定量限的测定
精确吸取适量帕托珠利和托曲珠利的标准工 作液溶于空白血浆中，分别制得0.05、0.1、0.2 μg/mL的帕托珠利添
加浓度和 0.025、0.05、0.1 μg/mL的 托曲珠利添加浓度。按血浆样品预处理步骤及色 谱条件上机分析，当S/N≥3和S
/N≥10时分别为其 检测限与定量限。
主要技术参数：
1. 氮 气：32L/min @100psi （可订制60L/min）
2. 露 点：<-55℃
3. 颗 粒：<0.01um
4. 滞留液体：无
5. 邻苯二甲酸：无
6. 噪 声：<55分贝
7. 接 口：Φ6mm快插接头（可根据客户要求更换）
8. 工作条件：环境温度5－35℃，湿度<80%
9. 电气要求：220V/50Hz，6A
10. 尺寸规格：90×60×70(长×宽×高，厘米)
11. 重 量：110kg
